魚(yú)elisa檢測(cè)試劑盒運(yùn)用雙抗夾心ELISA法定量測(cè)定血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和其他生物液體中(Ig)含量。下面我們來(lái)看看它具體實(shí)驗(yàn)前需要準(zhǔn)備好哪些工作以及操作步驟？
實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作：
1、準(zhǔn)備好所有實(shí)驗(yàn)額外所需物品，如試管 吸頭 移液器 離心機(jī)等。
2、確定試劑盒在有效期內(nèi)。
3、仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)。
4、按說(shuō)明書(shū)確定所有試劑齊全（數(shù)量 體積）。
5、標(biāo)本制備要規(guī)范，每份標(biāo)本體積要按2-3個(gè)復(fù)孔以上的量制備（貯存），盡量分裝做備份。
6、根據(jù)檢測(cè)標(biāo)本數(shù)量確定所需試劑的量。
7、按說(shuō)明書(shū)將所用試劑盒平衡至室溫，配制所需試劑。
魚(yú)elisa檢測(cè)試劑盒的操作步驟：
1、使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
2、根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
3、加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時(shí)。
4、甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿(mǎn)洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
5、每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
6、甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿(mǎn)洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
7、每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
8、取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。
9、在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
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