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鴨elisa檢測試劑盒的技術(shù)流程主要分6步

發(fā)布時間:2022-07-25   點擊次數(shù):1295次
  鴨elisa檢測試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中待測物質(zhì)水平。用純化的待測物質(zhì)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入待測物質(zhì),再與HRP標記的待測物質(zhì)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測物質(zhì)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中待測物質(zhì)濃度。
 
  鴨elisa檢測試劑盒的計算:
  以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
 
  鴨elisa檢測試劑盒的技術(shù)流程:
  1、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃過夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次。
  2、加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時。然后洗滌。
  3、加酶標抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體0.05ml。37℃孵育0.5~1小時,洗滌。
  4、加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。
  5、終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
  6、結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強,陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。
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